AATCC 100－2012 抗菌紡織品的評價方法

本標準1961年由AATCC委員會RA31研發完成：1965,1981,1988（標題改變），1993,1999,2012修正；1969,1971,1974,1985,2009,2010編輯修正；1977,1981,1989,1998重申；1986,2004編輯修正并重申。

1. 目的和范圍

1.1本測驗方法對抗菌活性的評估提供一個定量程序。對抗菌紡織材料的評價將根據其抗菌活性來確定。若抗菌整理試樣的抗菌活性（繁殖被抑制），通過定性程序，將抗菌整理試樣于空白樣的活性進行對比，就能清楚地說明抗菌的活性能否被接受。但是，如果殺菌的活性被期望或者暗示，則定量的評估是必要的。定量評估也為抗菌整理的紡織材料的使用提供了更清楚地描述的一種手段。

2.原理

2.1本測試方法通過織物與細菌接觸24小時后，對抗菌活性的定量評定，經培養后，細菌從織物上洗脫，通過細菌減少的百分比來計算。

3.專有術語

3.1抗菌活性：衡量抗菌劑功效的指標。

3.2抗菌劑：在紡織品上，任何可以殺死細菌（殺菌劑）、或者干擾其繁殖發育，具有抑菌活性（抑菌劑）的化學品。

4.安全防范

注：這些安全預防措施只是起到提供信息的目的。在這種測試方法中安全正確地使用處理材料的技術是用戶的責任。制造商必須對具有的細節進行參照，例如材料安全數據表和其他制造商建議。全部OSHA標準和規章也必須被參照。

4.1本測試應該由經過合適培訓的人員來執行。實驗室的微生物和生物醫學的生物研究安全性應參照美國衛生于公眾服務部的規定進行（見13.1）。

4.2警告：在試驗過程中使用的一些細菌可能引起過敏或致病。因此，一定要采取一些必要和合理的預防措施，以此來消除在實驗室和在相關環境人員的危險，可以穿保護衣和呼吸保護來防止細菌的滲透。

4.3良好的實驗室操作，在全部實驗室地區戴安全眼鏡。

4.4全部化學制品應該被小心處理。

4.5洗眼水及其他安全設備應放置在附近以便處理緊急事件的發生。

4.6在處理之前需對所有被污染的樣品盒測試材料進行全部消毒。

4.7在這個程序過程中，使用的化學制品的暴露必須等于或低于政府部門規定的水平（例如，職業安全與健康管理委員會的被控制可允許的暴露限制 見29CER1910.1000 www.osha.gov）。另外，美國政府工業衛生聯合會議的安全限量包括時間加權平均數，短期暴露限制和對空氣污染物暴露最高限度可作為一般指導，應參照執行（見13.2）。

5. 適用局限性

5.1對于定性測試，可采用相對快而容易的方法來確定紡織材料的抗菌活性，可參照AATCC147方法。紡織材料的抗菌活性評價：平行劃線法。

6.測試菌種

6.1試驗細菌

6.1.1金黃色葡萄球菌，ATCC 6538 革蘭氏陽性菌，CIP4.83，DSM799，NBRC13276，NCIMB9518或等同菌種。（見12.3和12.4）。

6.1.2 肺炎克雷伯菌，ATCC 4352，革蘭氏陰性菌，CIP104216，DSM789，NBRC13277，NCIMB10341或等同菌種。（見13.10）。

6.13根據樣品最終使用的目的，其他合適菌種也可被使用。

7. 設備，培養基和試劑

7.1培養基和試劑，合適的肉湯/瓊脂培養基有：

7.1.1營養肉湯/瓊脂培養基（NB，NA）

7.1.2胰蛋白胨大豆肉湯/瓊脂（TSB，TSA）

7.1.3腦心浸出液肉湯/瓊脂（BHIB，BHIA）

7.1.4 Muller-Hinton肉湯/瓊脂

7.1.5 對于疏水性的纖維織物，接種液可用：

    氯化鈉       8.5g

    瓊脂         3.0g

    無菌蒸餾水   1000ml

7.2設備

7.2.1培養箱，37±2℃（99±4℉）

7.2.2接種環

7.2.3酒精燈

7.2.4水浴鍋，45-50℃（113-122℉）

7.2.5滅菌移液管：1ml

7.2.6帶蓋試管：10ml

7.2.7無菌培養皿：100mm×15mm

7.2.8無菌鑷子

7.2.9立體顯微鏡（40x倍鏡）

7.2.10直尺

8.測試樣品

8.1準備。以下以紡織樣品來描述。紡織材料的織物形式不同可以進行適當的修改。

8.1.1試驗樣品的大小與形狀：試驗的紡織品切成直徑為4.8cm±0.1cm（1.9±0.03英寸）的圓形（盡可能地使用鋼模切?。瑢悠范询B在250ml帶有螺旋蓋的廣口瓶里，用于旋加1.0ml的接種液。樣品數量由纖維的類型和紡織品的結構來決定。例如，4片印染棉布的樣品將吸收1ml。每瓶所使用的樣品的片數應該被報告。

8.1.2空白對照樣。按上述相同的方法，準備沒有抗菌處理的相同纖維類型和織品結構的樣品，作為空白對照樣

8.1.3樣品的消毒。應根據不同的試樣選擇合適的消毒方法。使用的方法取決于纖維的類型和處理方法。棉花，醋酸鹽和一些人造纖維都可以在高壓滅菌器內消毒。羊毛可以在環氧乙烷或者在流動的蒸汽中間（部分）消毒，后者可能會對某些處理物造成小的損害。

9.試驗步驟

9.1接種菌液的濃度要求。從經接種并培養24h的營養肉湯培養物中吸取1.0ml±0.1ml，采用合適的稀釋液進行稀釋，對（1）未處理的空白對照樣品或者（2）“0”接觸時間的標準測試樣品接種，活菌濃度為1×10⁵cfu/ml~2×10⁵cfu/ml.試驗菌的稀釋液應采用營養肉湯（見7.1.1,7.1.5和12.5）

9.1.1織物的接種。當使用金黃色葡萄球菌時，震蕩24h的培養物并靜置15~20分鐘，采用合適的稀釋液，稀釋至活菌濃度為1×10⁵cfu/ml~2×10⁵cfu/ml.的接種濃度，用于試樣的接種。先在消過毒的培養皿里分別放上樣品，使用吸管吸取接種液1.0ml±0.1ml，接種在試樣上，應保證接種液的均勻分布（見12.6）。然后，將試樣無菌轉移到帶蓋的廣口瓶內，旋緊蓋子，防止蒸發。

9.1.2在接種之后（即“0”接觸時間），立即分別添加100ml±1ml中和液，到裝有接種的空白對照樣和接種的抗菌測試樣，以及未接種的抗菌測試樣的每個廣口瓶內。

9.1.3中和液應包含能中和抗菌紡織品的抗菌活性的成分，中和過程應注意紡織品的pH值要求（如整理劑、抗菌劑等）。使用何種組成的中和液完成中和過程應被報告（見12.7）

9.1.4用力振蕩每個“0”接觸時間廣口瓶1min。采用10倍稀釋法，用水做一系列的稀釋，澆灌營養瓊脂平皿，10⁰，10¹，10²的稀釋通常是合適的。

9.1.5定時保溫培養。對空白對照樣及抗菌處理樣，接種后，在37℃±2℃溫度培養18-24h．也可在接種后分別對各試樣保溫培養1~6h，為抗菌活性提供有用的信息。

9.1.6對定時保溫培養的樣品的廣口瓶，分別添加100ml±1ml中和液。用力振蕩1min。采用10倍稀釋法，用水做一系列的稀釋，澆灌營養平皿，10⁰，10¹，10²的稀釋通常是合適的。對于空白對照樣，可做進一步的稀釋。

9.1.7將已澆灌營養瓊脂并凝固的平皿放入培養箱，在37℃±2℃（或者其他最佳的溫度）保溫培養48h。

10.評價

10.1報告細菌計數作為每個樣品的細菌數量（在容器中的樣布），而不是每升中和液的細菌數量。報告在10⁰的“0”計數要小于100.

10.2通過以下公式計算細菌減少的百分比：

1）R=100（B-A）/B

R=細菌減少的百分比

A=接種且定時培養之后抗菌處理樣的細菌數

B=“0”接觸時間抗菌處理樣的細菌數

2）R=100（C-A）/C

C=“0”接種時間空白對照樣的細菌數

如果B和C不相同，取數值大的。如果B和C沒有明顯不同，（B/C）/2應按下面公式：

3）R=100（D-A/D）

D=（B+C）/2

10.3如果未處理的空白布沒有被提供，用以下公式：

Bg=100[(B-E)-(A-F)/B-E]

         A,B=（見10.2）

E=未接種的測試樣品的細菌數

F=未接種，但經預濕處理，且培養后，測試樣品的細菌數

Bg=背景有機體

10.4試驗的有效性判斷：（1）“0”接觸時間未接種抗菌測試布樣的菌落數為零；（2）接種且定時保溫培養后的空白對照樣的菌落數顯著增加；僅適用于用肉湯作稀釋液的情況。（見9.1和12.5要求）。

10.5對每個測試菌種，報告細菌減少的百分比數。

10.6通過試驗的標準必須被確定與相關方。

10.7報告接種稀釋液的使用情況。

11.精度和偏差

11.1（見12.8）研究顯示實驗室內平板計數測試（SPC）精度：

（a）分析員之間18%（b）分析員8%。

12.附注與參考

12.1出版物可從美國健康與人類服務機構-CDC/NH –HHHS出版物獲得。電話84-8395；網址：www.hhs.gov。

12.2小冊子可從出版局索取：ACGIH，Kemper Woods Center，1330 Kemper Meadow Dr.，Cincinnati OH 45240；電話：513/742-2020；網址：www.acgih.org。

12.3 ATCC即美國典型微生物菌種保藏：P.O. Box1549，ManassasVa 20108；電話：703/365-2700；傳真：703/365-2701；CIP即法國巴斯德研究所菌種保藏中心；DSM即德國微生物菌種保藏中心；NBRC即日本技術評價研究所生物資源中心；NCIMB即英國食品工業與海洋細菌菌種保藏中心；WFCC即世界培養物保藏協會。

12.4測試用的培養基保持純凈，無污染的，菌種無變異，使用無菌的轉接和接種以避免其受到污染，菌種嚴格堅持每月轉種以避免變異，定期檢查菌種純度，通過選擇性平板上的特征菌落。

12.5試驗菌的稀釋要在0.85%生理鹽水或合適的緩沖溶液中準備。當疏水性的織物要被測試時，如需要一個穩固的培養基，可以在織物的接種時所用的接種稀釋液中獲得。

12.6表面活性劑可以添加到稀釋液中，用來增加疏水性織物的濕潤度，但不能引起菌落數量的減少，應報告表面活性劑的使用和濃度。

12.7如果使用蒸餾水來替代中和液，總會有這種可能，一些抗微生物制劑被保留下來。

12.8皮勒.J.L.萊斯利，J.W.梅瑟，通過分析菌落數的復制技術錯誤，及食品保護。第45卷，1982，第238-240頁。